以下是關(guān)于超微量分光光度計的調(diào)試細節(jié):
一、調(diào)試前的準備
1. 儀器檢查:首先要確保儀器外觀完好,各部件連接正常,沒有損壞或松動的情況。檢查電源線、數(shù)據(jù)線等是否連接穩(wěn)固,避免在調(diào)試過程中出現(xiàn)接觸不良等問題。
2. 環(huán)境要求:將儀器放置在穩(wěn)定的工作臺上,避免強烈振動和電磁干擾。同時,要保證實驗室的溫度和濕度在適宜的范圍內(nèi),一般溫度控制在18-25℃,相對濕度不超過70%,以確保儀器的光學(xué)系統(tǒng)和電子元件能夠正常工作。
3. 預(yù)熱:打開儀器電源開關(guān),使其預(yù)熱15-30分鐘,讓儀器達到穩(wěn)定的工作狀態(tài),減小測量誤差。
二、光源調(diào)試
1. 亮度與穩(wěn)定性檢查:開啟光源后,觀察其亮度是否正常,有無閃爍或明暗變化等情況。若發(fā)現(xiàn)光源亮度不足或不穩(wěn)定,可能是燈泡老化或其他故障,需要及時更換燈泡或聯(lián)系維修人員進行檢修。
2. 光斑調(diào)整:通過調(diào)整光源的位置和角度,使光斑均勻地照射在單色器的入射狹縫上,并且光斑的中心應(yīng)與狹縫中心重合,以保證光線能夠順利進入單色器,提高光譜的純度和分辨率。
三、波長準確性調(diào)試
1. 使用標(biāo)準物質(zhì)校準:選擇已知吸收峰波長的標(biāo)準物質(zhì),如蒽、鐠釹濾光片等,將其放入樣品池中。然后在不同的波長下測量該標(biāo)準物質(zhì)的吸光度,繪制吸光度-波長曲線。通過比較測量得到的吸收峰波長與標(biāo)準物質(zhì)的實際吸收峰波長,計算出波長誤差,并根據(jù)儀器的校準功能對波長進行校正,使測量值與標(biāo)準值相符。
2. 重復(fù)性測試:在相同的條件下,多次測量同一標(biāo)準物質(zhì)的吸光度,觀察測量結(jié)果的重復(fù)性。如果重復(fù)性較差,可能是儀器的機械結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、光學(xué)系統(tǒng)失調(diào)或檢測器噪聲過大等原因?qū)е碌?,需要進一步檢查和排除故障。
四、吸光度準確性調(diào)試
1. 配制標(biāo)準溶液:根據(jù)儀器的測量范圍,配制一系列不同濃度的標(biāo)準溶液,如0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL等的蛋白質(zhì)溶液或核酸溶液。
2. 測量與對比:將標(biāo)準溶液依次放入樣品池中,測量其在特定波長下的吸光度,并記錄數(shù)據(jù)。以標(biāo)準溶液的濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準曲線。然后將實際測量的吸光度值代入標(biāo)準曲線方程中,計算得到相應(yīng)的濃度值,并與標(biāo)準溶液的實際濃度進行比較,評估吸光度的準確性。
五、基線校準
1. 空白對照:使用與樣品溶劑相同的空白溶液進行基線校準。將空白溶液放入樣品池中,在全波長范圍內(nèi)進行掃描,得到空白溶液的吸光度曲線,并將其作為基線存儲在儀器中。在進行樣品測量時,儀器會自動扣除基線的影響,從而得到更準確的樣品吸光度值。
2. 定期復(fù)查:在使用過程中,由于儀器的性能可能會發(fā)生變化,因此需要定期復(fù)查基線,特別是在長時間未使用儀器或更換了關(guān)鍵部件后,更應(yīng)重新進行基線校準,以確保測量結(jié)果的可靠性。